ГОСТ 9.082-77 ЕСЗКС. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий

ГОСТ 9.082-77 ЕСЗКС. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий

Последнее Обновление Декабрь 04, 2018
< Назад

Дата введения 01.01.1979

Настоящий стандарт распространяется на масла и смазки и устанавливает исследовательские лабораторные методы испытаний на стойкость к воздействию бактерий.

1.МЕТОД 1

1.1.Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, без дополнительного источника минерального и органического питания.

Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок при отсутствии минеральных и органических загрязнений.

1.2.Отбор образцов

1.2.1.Масла и смазки отбирают по ГОСТ 2517-85 в количестве 10-15 г.

1.2.2.Образцами являются масла и смазки в соответствии поставки без специальной очистки и стерилизации.

1.2.3.Количество образцов должно быть не менее пяти.

1.2.4.Штаммы бактерий

1.2.4.1.Для испытаний применяют смесь штаммов чистых культур бактерий:

Bacillus subtilis ВКМВ-1665Д,
Bacillus pumilus ВКМВ-1664Д,
Bacillus stearothermophilus ВКМВ-1668Д,
Bacillus coagulans ВКМВ-1669Д.

1.2.4.2.Чистые культуры бактерий получают во Всесоюзной коллекции микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.

1.2.4-1.2.4.2.(Измененная редакция, Изм. N 1).

1.2.4.3.Пересев, выращивание и хранение культур бактерий проводят, как указано в приложении 1.

1.3.Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048-89.

Масло МК-8 по ГОСТ 6457-66.

Масло МС-8 рк по ОСТ 38.01387-85.

Масло МС-8 п по ОСТ 38.101163-78.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1.4.Подготовка к испытаниям

1.4.1.Посуду и материалы готовят по ГОСТ 9.048-89.

1.4.2.Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89 и приложению 2.

Рецептура сред приведена в таблице.

Наименование реактивов Количество для среды
1- Чапека- Докса с агаром 2 — Чапека- Докса с агаром без сахарозы 3 — из выще- лоченного агара 4 — МПА 5 — Чапека- Докса без сахарозы 6 — Чапека- Докса 7 — БСА
1. Калий фосфорнокислый однозамещенный, г 0,7 0,7 0,7 0,7
2. Калий фосфорнокислый двузамещенный, г 0,3 0,3 0,3 0,3
3. Магний сернокислый, г 0,5 0,5 0,5 0,5
4. Натрий азотнокислый, г 2,0 2,0 2,0 2,0
5. Калий хлористый, г 0,5 0,5 0,5 0,5
6. Железо сернокислое, г 0,01 0,01 0,01 0,01
7. Сахароза, г 30,0 30,0
8. Агар-агар, г 20,0 Выще- лоченный 20,0 Выще- лоченный 20,0 20,0 20,0
9. Мясо-пептонный бульон, см До 1000 500,0
10. Четырех- баллинговое неохмеленное пивное сусло (4% сахара), см 480,0
11. Вода дистиллированная, см До 1000 До 1000 До 1000 До 1000 До 1000

1.4.3.Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в приложении 1.

1.4.4.Для контроля жизнеспособности бактерий в чашку Петри наливают среду 4 в количестве 20-30 см  и дают ей застыть.

1.4.5.Для размещения образцов смазок среду 3 наливают в чашку Петри в количестве 20-30 см  и дают ей застыть.

1.4.6.Для размещения образцов масел готовят лунки, для чего в застывшей среде 3 стерильным сверлом диаметром 10 мм просверливают пять лунок глубиной около 5 мм.

1.5.Проведение испытаний

1.5.1.Суспензию бактерий готовят, как указано в приложении 3.

1.5.2.Для заражения образцов используют водную суспензию смеси бактерий.

1.5.3.Образцы смазок наносят скальпелем в количестве пяти кусочков размером 10х10 мм толщиной 1,5-2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри, приготовленную, как указано в п.1.4.5.

1.5.4.Образцы масел наливают в лунки (на 1 мм ниже уровня среды), приготовленные, как указано в п.1.4.6.

1.5.5.Чашка Петри с образцами и контрольные чашки Петри, приготовленные, как указано в пп.1.4.4 и 1.4.5, помещают в бокс. Поверхность образцов и сред заражают водной суспензией смеси бактерий пульверизатором, не допуская слияния капель.

1.5.6.Чашки Петри с зараженными образцами и контрольные чашки (п.1.4.4) помещают в эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (29±2) °С.

1.5.7.Образцы выдерживают в термостате 56 сут.

1.5.8.Через 1-3 сут после начала испытаний осматривают контрольную чашку Петри.

Если на поверхности среды рост бактерий и образование пигмента не наблюдается, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.

1.5.9.Через 28 сут проводят промежуточный осмотр образцов. Испытания образцов, на которых обнаруживают развитие бактерий, прекращают.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1.5.10.По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают образцы.

1.6.Обработка результатов

1.6.1.Образцы масел и смазок осматривают через лупу при 2,5-7-кратном увеличении.

1.6.2.Масла и смазки считают бактериостойкими при отсутствии развития бактерий и пигментации на всех испытанных образцах.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.МЕТОД 2

2.1.Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, на среде с дополнительным источником минерального питания.

Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные загрязнения.

2.2.Отбор образцов — по п.1.2.

2.2.1.Виды бактерий — по п.1.2.4.

2.3.Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048-89.

2.4.Подготовка к испытаниям — по пп.1.4.2-1.4.4.

2.4.1.Для размещения образцов смазок среду 2 (см. табл.) наливают в чашку Петри в количестве 20-30 см  и дают ей застыть.

2.4.2.Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в п.1.4.6, используя среду 2.

2.4.3.(Исключен, Изм. N 1).

2.5.Проведение испытаний

2.5.1.Образцы смазок наносят, как указано в п.1.5.3, на поверхность среды в чашку Петри, приготовленную по п.2.4.1.

2.5.2.Образцы масел наливают в лунки, приготовленные, как указано в п.2.4.2, в соответствии с требованиями п.1.5.4.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.5.3.(Исключен, Изм. N 1).

2.5.4.Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп.1.5.5 и 1.5.6.

2.5.5.Образцы выдерживают в термостате 28 сут.

2.5.6.Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп.1.5.8-1.5.10 с промежуточным осмотром образцов через 7-14 сут.

2.6.Обработка результатов — по п.1.6.

2.7.Испытание масел допускается проводить по ГОСТ 9.052-88, метод 3. Вместо культур грибов по ГОСТ 9.052-88 используют бактериальные культуры по п.1.2.4. Отбор для оценки бактериостойкости масел проводят через каждые сутки.

(Введен дополнительно, Изм. N 1).

3.МЕТОД 3

3.1.Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, на среде с дополнительным источником минерального и органического питания.

Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные и органические загрязнения.

3.2.Отбор образцов — по п.1.2.

3.2.1.Виды бактерий — по п.1.2.4.

3.3.Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048-89.

3.4.Подготовка к испытаниям — по п.1.4.

3.4.1.Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в п.2.4.1, используя среду 4.

3.5.Проведение испытаний — по п.1.5.

3.5.1.Образцы выдерживают в термостате в условиях, указанных в п.1.5.6, 14 сут.

3.5.2.Промежуточный осмотр образцов проводят через 7 сут после начала испытаний.

3.6.Обработка результатов — по п.1.6.

4.ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ — по ГОСТ 9.023-74.

Приложение 1 Обязательное.ПЕРЕСЕВ, ВЫРАЩИВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ

1.Пересев культур бактерий

1.1.Пересев культур бактерий проводят в специальном боксе, предварительно продезинфицированном.

1.2.На пробирках, приготовленных для пересева, обозначают виды бактерий, ставят дату пересева, которую заносят в журнал регистрации пересева культур бактерий.

1.3.Пересев культур бактерий в пробирки со стерильной питательной средой проводят при помощи бактериологической петли. Петлю изготавливают из проволоки (платина, хром, никель, молибден) диаметром (0,6±0,1) мм, длиной (120±20) мм, укрепленной в стеклянном или металлическом держателе.

1.4.Пробирки, засеянные бактериями, помещают в термостат при температуре (29±2) °С и выдерживают в нем три-четыре дня до появления хорошего роста и пигментации.

1.5.Чистоту выросшей культуры контролируют визуально и микроскопированием.

1.4, 1.5. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2.Выращивание и хранение культур бактерий

2.1.Чистые культуры бактерий для проведения испытаний выращивают и хранят в пробирке со скошенной поверхностью питательной среды.

Допускается хранить их в виде суспензии в среде 5 п.1.4.2 в пробирках под слоем минеральных масел МК-8, или МС-8рк, или МС-8п толщиной 1 см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2.Культуры бактерий пересевают в пробирки для получения музейных партий.

Примечание. Музейные партии предназначены для сохранения чистых культур и получения из них рабочих партий.

2.3.Количество музейных партий рекомендуется иметь от 3 до 5 в зависимости от объема проводимых испытаний в течение месяца.

2.4.Пересев музейных культур необходимо проводить 1 раз в 3 мес.

2.5.Для выращивания культур бактерий используют среду мясопептонного агара (МПА) или среду 7-БСА.

2.4, 2.5. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2.6.Пробирки с чистыми культурами бактерий хранят в холодильнике при температуре (7±3) °С.

2.7.Допустимый срок хранения культур — 6 мес.

Приложение 2 Обязательное. ПРИГОТОВЛЕНИЕ МЯСО-ПЕПТОННОГО АГАРА

1.Для приготовления мясо-пептонного агара (МПА) можно использовать мясо-пептонный бульон (МПБ). Основой для его приготовления является мясная вода, которую обычно готовят следующим образом: 500 г мяса, освобожденного от костей, жира и сухожилий, разрезают на мелкие куски (или пропускают через мясорубку), заливают 1 л водопроводной воды и оставляют при комнатной температуре на 12 ч, или в термостате при 30 °С на 6 ч, или при 37 °С — на 2 ч. В это время из мяса экстрагируются различные вещества, в том числе водорастворимые витамины. Затем мясо отжимают через марлю или полотно и фильтрат кипятят 5 мин. При этом свертываются белки. Остывшую массу фильтруют без перемешивания через ватный фильтр и добавляют воды до первоначального объема. К мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% поваренной соли.

2.К МПБ, бульону Хоттингера или разбавленному гидролизату Хоттингера добавляют 2-3% агар-агара. рН МПА должен быть 7±0,2. Стерилизуют при 1 атм. Стерильная среда может храниться в течение 1-2 месяцев.

3.Для приготовления МПА можно также использовать бульон Хоттингера (180 мг % аминого азота) или гидролизат Хоттингера (800 мг % аминого азота). Для приготовления МПА гидролизат Хоттингера разбавляют в четыре-пять раз.

Приложение 3 Обязательное. ПРИГОТОВЛЕНИЕ СУСПЕНЗИЙ БАКТЕРИЙ И КОНТРОЛЬ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ БАКТЕРИЙ

1.Для приготовления суспензии клеток используют культуры бактерий возрастом от 2 до 5 сут, считая с момента пересева.

2.Суспензию клеток с концентрацией 1-2 млн/см  готовят отдельно для каждого вида бактерий. Для этого в пробирку или колбу, содержащую (20±5) см стерильной воды, переносят клетки бактерий из пробирки с чистой культурой.

3.Перенос бактериальных клеток из пробирки в колбу осуществляется захватом клеток бактериологической петлей.

4.Приготовленные в соответствии с требованиями пп.1-3 суспензии бактерий смешивают в равных объемах и используют для заражения образцов.

5.Срок хранения суспензии бактерий не более 4 ч с момента их приготовления.

_________________________________

Добавить комментарий

Войти с помощью: 

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Разместить задание
Авторизация
*
*
Войти с помощью: 
Регистрация
*
*
Номер телефона без знака «+», например «79876543210». На указанный номер будет выслан код подтверждения.

*
Войти с помощью: 
Нажимая кнопку "Зарегистрироваться" Вы даете согласие на обработку персональных данных в соответствии с "Пользовательским соглашением".
Генерация пароля