ГОСТ 9.052-88 ЕСЗКС. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов

ГОСТ 9.052-88 ЕСЗКС. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов

Последнее Обновление Декабрь 04, 2018
< Назад

Дата введения 01.01.89

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Министерством высшего и среднего специального образования СССР
ИСПОЛНИТЕЛИ
А.А. Гуреев, д-р техн. наук; Е.Г. Торопова, д-р биолог, наук; Н.Н. Угарова, д-р хим. наук; Е.А. Иозеп, канд. техн. наук; А.А. Байгожин, д-р хим. наук; А.А. Герасименко, д-р техн. наук; З.С. Боголюбова (руководители темы);И.А. Тимохин, канд. хим. наук; Н.В. Зубкова, канд. техн. наук; Л.Ю. Бровко, канд. хим. наук; Б.А. Чепенко, канд. техн. наук; А.А. Самунина, канд. биолог, наук; Г.В. Матюша, А.И. Солонович, Л.В. Березниковская.
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 25.03.88 № 754
3. Срок первой проверки — 1993 г.
4. ВЗАМЕН ГОСТ 9.052-75
5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка
Номер пункта, подпункта, приложения
ГОСТ 9.048-89
1.3.3, 1.4, 1.5.1, 1.5.2, 1.5.3, 1.6.1, 2.4, 2.6.1, 3.4, 3.6.1, 4.4, приложение
ГОСТ 61-75
Приложение
колбы, пробирки. Технические условия»>ГОСТ 1770-74
»
ГОСТ 2517-85
1.2.1
ГОСТ 4523-77
Приложение
ГОСТ 6709-72
»
ГОСТ 10652-73
»
ГОСТ 16317-87
»
ГОСТ 25336-82
»
ГОСТ 29169-91
»
ГОСТ 29329-92
»
6. Ограничение срока действия снято по решению Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
7. Переиздание. Сентябрь 1995 г.
Настоящий стандарт распространяется на масла и смазки и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов:
1 — для установления грибостойкости масел и смазок при отсутствии минеральных и органических загрязнений;
2 — для установления грибостойкости смазок в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;
3 — для установления грибостойкости масел в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;
4 — для установления грибостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные и органические загрязнения.
Смазки, применяемые для оптических приборов, испытывают только методом 1.
Методы применяют при испытании масел и смазок, к которым в стандартах или технических условиях предъявляют требования грибостойкости.

1. МЕТОД 1

1.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией спор грибов, в условиях оптимальных для развития грибов, без дополнительного источника минерального и органического питания.
mso-bidi-font-family:Arial’>1.2. Отбор образцов
1.2.1. Масла и смазки отбирают по ГОСТ 2517-85 массой 10 — 15 г.
1.2.2. Образцами являются масла и смазки в состоянии поставки, без специальной очистки и стерилизации.
1.2.3. Количество параллельных образцов должно быть не менее пяти.
Aspergillus niger van Tieghem
Penicillium chrysogenum Thorn
Penicillium cyclopium Westling
Scopulariopsis brevicaulis (Sacc.) Bainier
Paecilomyces varioti Bainier
1.3.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.
выращивание и хранение культур грибов — по ГОСТ 9.048-89.
материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048-89.
1.5. Подготовка к испытаниям
1.5.1. Посуду и материалы готовят по ГОСТ 9.048-89.
1.5.2. Среды для выращивания, хранения культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89.
Рецептура сред приведена в таблице.
Наименование реактива
Среда 1 (Чапека-Докса с агаром)
Среда 2 (Чапека-Докса с агаром без сахарозы)
Среда 3 (выщелоченный агар)
Среда 4 (сусло-агар)
Среда 5 (минеральная без сахарозы)
Однозамещенный фосфорнокислый калий, г
0,7
0,7
1,0
Двузамещенный фосфорнокислый калий, г
0,3
0,3
Сернокислый магний, г
0,5
0,5
0,5
Азотнокислый натрий, г
2,0
2,0
3,0
Хлористый калий, г
0,5
0,5
2,0
Сернокислое железо, г
0,01
0,01
Сахароза, г
30,0
Агар-агар, г
30,0
Выщелоченный 30,0
Выщелоченный 30,0
30,0
Четырехбаллинговое неохмеленное пивное сусло (4 % сахара), см3
До 1000
Дистиллированная вода, см3
До 1000
Водопроводная вода, см3
До 1000
1.5.3. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048-89, используя грибы, приведенные в п.1.3.1
Образцы смазок наносят на предметные стекла, покрывая всю поверхность слоем 1,5-2,0 мм, и помещают в чашки Петри.
1.5.5. Контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048-89.
Для контроля жизнеспособности спор грибов в чашку Петри наливают среду 1 или 4 в количестве 20-30 см3 и дают ей застыть
1.6. Проведение испытаний
1.6.1. Водную суспензию спор грибов готовят по ГОСТ 9.048-89, используя грибы, выращенные, как указано в п. 1.5.3.
не допуская слияния капель.
1.6.3. Образцы масел и смазок после заражения выдерживают 1-2 ч при температуре (25 ± 10) °С.
на дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (29 ± 2) С.
1.6.5. Образцы выдерживают в термостате 56 сут.
споры грибов считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с вновь приготовленной суспензией спор из новой партии грибов.
1.6.7. Через 28 сут производят промежуточный осмотр образцов. Испытания образцов, на которых обнаруживают развитие грибов, прекращают.
1.7. Обработка результатов

2. МЕТОД 2

2.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.
2.2. Отбор образцов — по п. 1.2.
2.3. Виды грибов — по п. 1.3.
материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048-89.
2.5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1-1.5.3, 1.5.5.
2.6.1. Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048-89.
2.6.2. Смазки наносят скальпелем в количестве пяти образцов размером 10×10 мм толщиной 1,5-2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри, подготовленную, как указано в п. 2.5.1.
2.6.3. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп. 1.6.2-1.6.4.
2.6.4. Образцы выдерживают в течение 28 сут.
2.6.5. Дальнейший порядок проведения испытаний — по пп. 1.6.6-1.6.8 с промежуточным осмотром образцов через 14 сут.
2.7. Обработка результатов — по пп. 1.7.1, 1.7.2.

3. МЕТОД 3

3.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.
3.2. Отбор образцов — по п. 1.2.
3.3. Виды грибов — по п. 1.3.
материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048-89.
3.5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1 -1.5.3 и 1.5.5.
3.5.2. Контролем служит суспензия спор грибов в среде 5.
3.6. Проведение испытаний.
3.6.1. Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048-89.
3.6.2. Образцы масел в количестве 2 см3 вносят не менее чем в пять пробирок, приготовленных, как указано в п.3.5.1.
3.6.3. Пробирки помещают в наклонном положении под углом 30° и выдерживают в термостате при температуре (29 ± 2) °С.
3.6.4. Пробирки с образцами выдерживают в термостате 10 сут.
При появлении признаков развития грибов в образцах испытания прекращают.
3.6.6. По окончании испытаний пробирки с образцами извлекают из термостата и осматривают невооруженным глазом или с помощью лупы при 2,5-5,0-кратном увеличении.
3.7. Обработка результатов.
3.7.1. Масла считаются грибостойкими, если отсутствует развитие грибов на всех испытанных образцах (отсутствует пленка на границе раздела среда — масло, в пробирках среда прозрачна и не пигментирована, нет осадка).
3.7.2. Масла считаются не стойкими к плесневым грибам, если на образцах наблюдается развитие грибов, признаком которого служит образование пленки на границе раздела среда — масло, помутнение и пигментация среды, образование осадка.
3.7.3. Допускается оценивать грибостойкость масел биолюминесцентным методом, приведенным в приложении.

4. МЕТОД 4

4.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального и органического питания.
4.2. Отбор образцов — по п. 1.2.
4.3. Виды грибов — по п. 1.3.
материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048-89.
4.5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1 -1.5.3, 1.5.5.
4.5.1. Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в п. 2.5.1, используя среду 1 или 4.
4.5.2. Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в п. 1.5.4, используя среду 1 или 4.
4.6. Проведение испытаний — по п. 2.6.
4.6.1. Образцы выдерживают в термостате в условиях, приведенных в п. 1.6.4, 14 сут.
4.6.2. Промежуточный осмотр образцов производят через 7 сут после начала испытаний.
4.7. Обработка результатов — по пп. 1.7.1. и 1.7.2.

5. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ — по ГОСТ 9.048-89.

ПРИЛОЖЕНИЕ Обязательное. БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД ОЦЕНКИ ГРИБОСТОЙКОСТИ

Сущность метода заключается в определении количества внутриклеточной аденозин-5-трифосфорной кислоты динатриевой соли (АТФ) в минеральной среде после испытания масел на грибостойкость (п. 3.6.5) с помощью специфической ферментативной хемилюминесцентной реакции с использованием люциферин-люци-феразной системы светляков. Интенсивность излучаемого свечения прямо пропорциональна концентрации АТФ. Концентрация АТФ пропорциональна количеству живых клеток, так как ее содержание во всех типах живых клеток примерно одинаково и составляет 1 -10 мг/г сухого веса. Этот факт является основой биолюминесцентного метода определения биомассы.

1. материалы и реактивы

Хемилюминометр медицинский ДЛИ 31.560.000, предназначенный для измерения интенсивности сверхслабого свечения в области спектра 400-600 нм. Допускается использовать другие приборы аналогичного назначения, обеспечивающие измерение световых потоков от 104 до 108 квант/с.
Весы для статического взвешивания по ГОСТ 29329-92.
Термостат, обеспечивающий температуру нагрева до 200 С.
Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 16317-87.
Дозатор для отбора проб 0,1 см3.
Лабораторный рН-метр.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82.
Колбы цилиндрические мензурные вместимостью 25 см3 по колбы, пробирки. Технические условия»>ГОСТ 1770-74.
Пипетки вместимостью 1, 10 см3 по ГОСТ 29169-91.
Аденозин-5-трифосфорной кислоты динатриевая соль, 3-водная (АТФ).
Люцифераза светляков.
Люциферин
Диметилсульфоксид (ДМСО), х.ч.
Трис- (оксиметил) — аминометан, х.ч.
Кислота уксусная, х.ч. по ГОСТ 61-75.
Магний сернокислый, 7-водный, х.ч. по ГОСТ 4523-77.
Соль динатриевая этилендиамин — N, N, N´,  — тетрауксусной кислоты, 2-водная (трилон Б) (ЭДТА) по ГОСТ 10652-73.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

2. Подготовка к испытаниям

2.1. Стерилизуют посуду по ГОСТ 9.048-89.
доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают до полного растворения. Раствор АТФ 1 ммоль/дм3 разливают на порции объемом 1 см3 и хранят при температуре минус 20 С. В замороженном виде раствор АТФ допускается хранить не более 3 месяцев.
порцию раствора АТФ 1 ммоль/дм3 (по п. 2.2) размораживают, отбирают с помощью дозатора 0,1 см3 раствора и помещают его в пробирку, содержащую 10 см3 дистиллированной воды. Раствор АТФ 10 мкмоль/дм3 готовят непосредственно перед применением.
2.4. Готовят 20 %-ный раствор уксусной кислоты: 10 см3 уксусной кислоты разбавляют 40 см3 дистиллированной воды.
в мерную колбу вместимостью 50 см3 загружают 0,605 г трис-(оксиметил)-аминометана, 0,123 г сернокислого магния, 0,036 г ЭДТА, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают до полного растворения. Затем все содержимое колбы переносят в стакан вместимостью 100 см3 и титруют 20 %-ным раствором уксусной кислоты до рН-7,8.
2.6. Готовят раствор люциферазы: 10 мг люциферазы растворяют в 10 см3 0,1 моль/дм3 трис-ацетатном буферном растворе (п. 2.5). Приготовленный раствор люциферазы хранят во льду.
2.7. Готовят раствор люциферина: 3 мг люциферина растворяют в 10 см3 0,1 моль/дм3 трис-ацетатного буферного раствора (п. 2.5).
2.8. Готовят экстракт клеток: отбирают из пробирок с образцами после выдержки их в термостате 3 и 5 сут (п. 3.6.5) пробу минеральной среды объемом 0,1 см3 и добавляют ее в пробирку к 0,9 см3 диметилсульфоксида (ДМСО). Смесь перемешивают встряхиванием в течение 1-2 мин. Экстракт пригоден для анализа в течение 1 сут.

3. Проведение испытаний

3.1. Помещают в кювету люминометра с помощью дозатора последовательно 0,1 см3 раствора люциферина, 0,1 см3раствора люциферазы, 0,7 см3 трис-ацетатного буферного раствора и регистрируют интенсивность фонового свечения Iфон в милливольтах.
3.2. Добавляют в ту же кювету дозатором 0,1 см3 экстракта клеток (п. 2.8), перемешивают и регистрируют сигнал интенсивности люминесценции I1.
3.3. Добавляют в ту же кювету 0,02 см3 стандартного раствора АТФ (п. 2.3) и регистрируют сигнал интенсивности люминесценции I2.

4. Обработка результатов

4.1. Интенсивность люминесценции образца (Iобр) в милливольтах вычисляют по формуле
                                                                (1)
4.2. Интенсивность люминесценции стандартного раствора АТФ (Iст) милливольтах вычисляют по формуле
                                                                    (2)
4.3. Концентрации АТФ [АТФ]обр в микромолях в образце вычисляют по формуле

 

 

(3)

где V — объем экстракта клеток, равный 0,1 см3;
V1 — объем реакционной смеси до добавления стандартного раствора АТФ, равный 1 см3;
V2 — объем реакционной смеси после добавления стандартного раствора АТФ, равный 1,02 см3;
Vст — объем добавленного стандартного раствора АТФ, равный 0,02 см3;
[АТФ]ст — концентрация АТФ в стандартном растворе, равная 10 мкмоль;
10 — коэффициент, учитывающий разбавление пробы образца при экстракции клеток диметилсульфоксидом в 10 раз.
При упрощении формула (3) приобретает вид:
4.4. Масла являются грибостойкими, если концентрация АТФ меньше или равна 10-7 моль, масла не грибостойки, если концентрация АТФ в образцах больше 10-7 моль.

___________________________________________

Добавить комментарий

Войти с помощью: 

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Разместить задание
Авторизация
*
*
Войти с помощью: 
Регистрация
*
*
Номер телефона без знака «+», например «79876543210». На указанный номер будет выслан код подтверждения.

*
Войти с помощью: 
Нажимая кнопку "Зарегистрироваться" Вы даете согласие на обработку персональных данных в соответствии с "Пользовательским соглашением".
Генерация пароля